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细胞增殖对生命体至关重要，是生长、发育、繁殖和遗传的基础，其能力能反映细胞活性。细胞增殖主要就是细胞分裂，一个细胞变成两个，分裂前要做物质准备，这整个过程是高度受控且连续的。检测细胞活性和增殖就像给细胞体检，能看出细胞生长状态，还能了解化合物或外界刺激的细胞毒性，这是评估细胞活性、基因毒性和药物活性的基本方法，在分子生物学、肿瘤生物学、药代动力学等多领域都很重要。在药物研发中，早期筛选化合物和后期安全性评估都离不开它。  

各位老师在做细胞培养实验的时候，是不是老琢磨：“咋知道细胞是死是活呢？它们活得咋样啊？” 别愁，厚百商城来给您支招啦。

咱可以把分析细胞活力和增殖测定的方法大概分成 5 类：

1.代谢增殖测定

Metabolic proliferation assay

MTT 检测法：就好比活细胞里的线粒体有个小助手叫琥珀酸脱氢酶。这个小助手可厉害了，能把额外加进去的 MTT 变成一种不溶于水的蓝紫色结晶，叫甲瓒，这结晶就留在细胞里了。死细胞可没这本事。然后呢，用二甲基亚砜（DMSO）把细胞里的甲瓒溶解掉，再用酶标仪在 490nm 波长那儿测一下光吸收值，也就是 OD 值。在一定数量的细胞范围内，这个吸光值越大，就说明活细胞越多，细胞活性越好。

XTT 检测法：这个方法和 MTT 检测法有点像，也是靠活细胞线粒体里的琥珀酸脱氢酶起作用。不过呢，XTT 法产生的还原产物是水溶性的橙黄色甲肷。这个甲肷不用像 MTT 检测法那样还得用 DMSO 溶解，直接就能用酶标仪测吸光值。就像给细胞做了个简单的小测试，吸光值越大，活细胞就越多。

CCK - 8 检测法：基于 WST - 8原理，有个帮手叫 1 - 甲氧基 - 5 - 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯在的时候，细胞线粒体里的脱氢酶就把 WST - 8 变成橙黄色的甲瓒产物，这东西水溶性特好。细胞繁殖又多又快，甲瓒产物就多，颜色深；细胞中毒了，甲瓒产物少，颜色浅。用仪器测 450nm 处吸光值，就能知道细胞是在繁殖还是受毒性影响了。

CCK-8实验原理

2.DNA 合成增殖实验

DNA synthesis and proliferation experiment

BrdU 检测法：BrdU 就像是胸腺嘧啶核苷（Thymine）的一个小跟班。它能给活细胞新合成的 DNA 做标记，这个 DNA 是在细胞活性周期 S 期合成的哦。BrdU 会跟着 DNA 复制进入子细胞，所以加了 BrdU 之后，那些分裂增殖的细胞 DNA 都带上 BrdU 标记了。然后呢，要用抗 BrdU 单克隆抗体去检测，这样就能知道细胞的增殖能力了。不过要注意哦，检测的时候得把部分 DNA 变成单股，这样抗体才能检测到，而且 BrdU 怕光，操作的时候要在暗暗的地方，培养的时候也得避光。

EdU 检测法：EdU 和 BrdU 检测法原理差不多，都是代替胸腺嘧啶（Thymine，T）钻进正在复制的 DNA 里。然后只要加上能和 EdU 反应的荧光染料，就能通过检测荧光值知道细胞增殖的情况啦。这个方法比 BrdU 检测法方便，不用给 DNA 变性处理。

EdU反应原理

3.荧光染料增殖实验

Fluorescent dye proliferation experiment

CFSE 检测法：CFSE 是一种很神奇的荧光染料，它能轻松穿过细胞膜进到细胞里。进去之后呢，会和细胞里本身的酯酶发生反应被激发，然后就发出绿色荧光。这个带荧光的 CFSE 还会和细胞骨架蛋白抱在一起，变成稳定的胞内荧光蛋白。细胞每次分裂增殖，这个胞内荧光蛋白就会平均分给下一代细胞，就像分糖果一样。这样细胞的荧光强度就会随着增殖代数增加越来越弱。用流式细胞仪检测分析一下这个荧光强度，就能知道细胞分裂增殖的情况啦。不过 CFSE 的浓度很重要，会直接影响判断细胞增殖的结果哦。

4.台盼蓝细胞计数

Trypan blue cell counting

台盼蓝计数法：台盼蓝就像一个小侦探，专门检查细胞是死是活。它是一种蓝色的细胞活性染料，要是细胞的细胞膜完整，它就进不去细胞里面。可要是细胞死了，细胞膜就不稳定了，台盼蓝就能进去把细胞染成蓝色。在细胞实验里，经常和自动细胞计数仪或者血球计数板一起用，来区分活细胞和死细胞，还能看看细胞膜是不是完整呢。

5.化学发光细胞活性测定

Chemiluminescence-based Cell Viability Assay

ATP 发光法：ATP 就像是细胞的能量小钱包，是细胞能量的直接来源。ATP 发光法就是看看细胞里这个能量小钱包有多鼓，也就是检测细胞内 ATP 的含量，来分析细胞增殖的情况。市面上的做法是用外源的萤火虫荧光素（Luciferin）和荧光素酶（Luciferase），靠着细胞里的 ATP 当能量，发生氧化反应就会发光。咱就看这个光有多亮，就能知道 ATP 含量多少，进而判断细胞增殖得好不好。

发光检测原理

高通量筛选的自动化操作系统里用ATP发光法，也是非常合适的，效率高，操作简单。这个方法的检测灵敏度可谓超高，即使样本中仅仅存在大约 10 个细胞，它也能够精准地检测出来。并且，其检测速度极为迅速，当对一个 96 孔板进行检测时，差不多仅需十分钟左右即可完成。如此高效的特性，使其在高通量检测中再合适不过了。在高通量筛选的自动化操作系统中，采用 ATP 发光法也是非常恰当的选择。这种方法不仅效率高，而且操作简便，能够极大地提高检测的准确性和可靠性，为科研和临床检测等领域提供了有力的技术支持。

写在最后：

细胞活力检测的方法多种多样，然而选择合适的检测方法至关重要。不同的检测方法在灵敏度、准确性、适用范围等方面存在差异。例如，某些方法可能对特定类型的细胞更为有效，而另一些方法则可能在特定的实验条件下表现更优。

因此，根据具体的实验需求和研究目的来选择合适的细胞活力检测方法是十分关键的。

如果您有具体的需求，可以随时联系我们。我们拥有专业的团队和丰富的经验，能够为您提供个性化的解决方案，帮助您选择最适合您实验的细胞活力检测方法，确保您的研究工作顺利进行。